เลิกปวดหัวกับ Derivatization! วิเคราะห์ Glyphosate, AMPA, Glufosinate ได้ตรง ๆ ด้วย Waters APP Column
ถ้าคุณเคยนั่งทำ Derivatization กับ Glyphosate จนปวดหัว แล้วยังต้องมานั่งลุ้นว่า SPE Cleanup จะหลุดตรงไหนอีก... บทความนี้มีข่าวดีมาบอก เพราะตอนนี้มีทางลัดที่ตรวจสารกลุ่ม Anionic Polar Pesticides ได้โดยตรง ไม่ต้องทำอนุพันธ์ ไม่ต้อง Cleanup ให้เสียเวลาอีกต่อไป
1. ทำไมสารกลุ่ม Anionic Polar Pesticides ถึงวิเคราะห์ยาก?
สารกลุ่มนี้ถูกใช้กันอย่างแพร่หลายในภาคเกษตร และด้วยความกังวลด้านพิษวิทยา สหภาพยุโรปจึงกำหนดเกณฑ์ปริมาณสารพิษตกค้างสูงสุด (Maximum Residue Limit, MRL) ไว้เข้มงวดมาก นั่นหมายความว่าห้องแล็บต้องตรวจได้แม่นยำในระดับ Trace Analysis และรายงานผลได้รวดเร็ว แต่ปัญหาคือโมเลกุลของสารกลุ่มนี้มีขั้วสูงและมีประจุลบ ทำให้ถ้าใช้วิธี Reverse Phase แบบทั่วไป จะเจอ 3 ปัญหาใหญ่ดังนี้
2. Waters APP Column แยกสารประจุลบได้โดยตรง — เคล็ดลับอยู่ตรงไหน?
Stationary Phase ของคอลัมน์นี้ใช้เทคโนโลยี Ethylene-bridged Hybrid (BEH) ร่วมกับหมู่ Diethylamine (DEA) ทำให้จับและแยกสารที่เราสนใจได้ด้วยกลไกผสม HILIC + Weak Anion Exchange
- HILIC: ผิวอนุภาคสร้างชั้นน้ำบาง ๆ ขึ้นมา ทำให้จับโมเลกุลมีขั้วได้ดี
- WAX (Weak Anion Exchange): DEA มีประจุบวกในสภาวะกรดอ่อน ทำให้ดึงสารประจุลบไว้ด้วยแรงแลกเปลี่ยนไอออน
ผลที่ได้คือคอลัมน์นี้แยกคู่สารที่มีโครงสร้างใกล้เคียงกันได้อย่างชัดเจน เช่น Glyphosate/AMPA และ Glufosinate/MPPA/NAG โดยพีคสมมาตรและไม่มี Tailing ให้ปวดหัว
3. วิธีเตรียมตัวอย่าง: เลือกให้ตรงกับเมทริกซ์ของคุณ
ไม่ว่าจะเป็นตัวอย่างพืชผลหรือน้ำ ก็มีวิธีเตรียมตัวอย่างที่เหมาะสมรองรับ โดยไม่ต้องผ่านขั้นตอน Cleanup ที่ยุ่งยากเหมือนเดิม
| QuPPe สำหรับผัก ผลไม้ ธัญพืช | Direct Injection สำหรับน้ำ |
|---|---|
LOQ ในตัวอย่าง 0.5–2 µg/kg
|
LOQ ต่ำสุด 10 ng/L
|
💡 QuPPe ไม่มีขั้น Cleanup เพื่อไม่ให้สารขั้วสูงสูญหาย จึงเหมาะกับงาน Multiresidue
💡 ส่วน Direct Injection เหมาะกับน้ำที่สะอาดและต้องใช้ MS/MS ที่ไวมาก
4. ผลการทดสอบจากเมทริกซ์จริง 4 งาน
แนวคิดดี ๆ ต้องพิสูจน์ได้ด้วยข้อมูลจริง นี่คือผลการทดสอบจาก 4 สถานการณ์ใช้งานจริง ที่แสดงให้เห็นว่า Waters APP Column ทำงานได้ดีแค่ไหน
- ตรวจ Glyphosate, AMPA, Glufosinate, MPPA, NAG, Ethephon, Fosetyl-Al และ Phosphonic Acid ในช่วง 0.0005–0.100 mg/kg โดยไม่ใช้ Internal Standard
- ค่า Trueness และ %RSD ผ่านเกณฑ์ SANTE/12682/2019
- ประเมินที่ระดับความเข้มข้น 0.02–0.05 mg/kg ให้ค่า Trueness อยู่ในช่วง 90–104%
- ค่า Repeatability และ Reproducibility ต่ำกว่า 7% และ Retention Time ภายในแล็บมีความแปรผันไม่เกิน 0.15%
- In-vial LOQ อยู่ที่ 0.25 ng/mL เท่ากันทั้งสองเมทริกซ์ (ยกเว้น AMPA ในแป้งสาลีอยู่ที่ 0.63 ng/mL)
- Sample LOQ ต่างกันตาม Dilution Factor ของ QuPPe v12 — แตงกวาอยู่ที่ 0.5 µg/kg และแป้งสาลีอยู่ที่ 2 µg/kg (ยกเว้น AMPA ในแป้งสาลีสูงกว่าที่ 5 µg/kg จาก Matrix Suppression)
- ความเที่ยงจากการฉีดซ้ำ 30 เข็ม %RSD ต่ำกว่า 3% ยกเว้น Fosetyl-Al อยู่ที่ 7%
- ตรวจ Glyphosate, AMPA และ Glufosinate โดยไม่ Derivatize และไม่ Cleanup
ข้อมูลสมรรถนะอ้างอิงจากเอกสาร Application ของ Waters ผลจริงขึ้นกับเครื่องมือ เมทริกซ์ และวิธีของแต่ละห้องปฏิบัติการ
5. เคล็ดลับให้ระบบนิ่งและพีคสวย
รายละเอียดเล็ก ๆ น้อย ๆ ที่ช่วยให้ผลลัพธ์ออกมาสม่ำเสมอ ลองเช็คดู...
ใช้ Polypropylene Vial เท่านั้น ห้ามใช้ขวดแก้ว เพราะ Glyphosate และสารขั้วสูงจะดูดติดผิวแก้ว
ห้ามใช้น้ำ 100% เพราะเป็น Strong Solvent ในระบบ HILIC ทำให้พีคบิดเบี้ยว ให้เตรียมในตัวทำละลายผสมที่มี Methanol หรือ Acetonitrile
ใช้ Mobile Phase ที่สะอาดที่สุดเท่าที่เป็นไปได้ เพื่อลดการรบกวนจากสิ่งไม่พึงประสงค์
Strong 10:90 ACN:Water
Weak 90:10 ACN:Water
Seal 10% Methanol ในน้ำ
Qualifier MRM 143 > 79 มี Noise สูงที่ความเข้มข้นต่ำกว่า 0.05 mg/kg ให้ใช้ MRM 143 > 107 ร่วมกับการคุม Retention Time และปรับ MRM Window ให้แคบลง
Flush ด้วย ACN:Water 50:50 ถ้ายังไม่หายให้ใช้ 5:95 หรือ Gradient น้ำ 0–100% 10 นาที และลด Flow เมื่อน้ำเกิน 60%
เก็บใน 100% ACN หลังล้างเกลือออก ห้ามเก็บในน้ำล้วน
6. สรุป และชุดโซลูชันสำหรับงานนี้
การตัด Derivatization และ SPE Cleanup ออกไปเลย ช่วยลดขั้นตอน ลดความเสี่ยงผิดพลาด ลด Turnaround Time (TAT) และลดต้นทุนต่อตัวอย่างไปพร้อมกัน ขณะที่กลไก HILIC/WAX บน APP Column ร่วมกับ LC-MS/MS ที่ Sensitive เพียงพอ ก็ให้ผลแบบ Multi-residue ที่นิ่งและผ่านเกณฑ์ SANTE/12682/2019 ได้สบาย ๆ
|
|
กำลังจะเริ่มวิเคราะห์สารกลุ่มนี้ หรืออยากปรับวิธีเดิมให้เร็วขึ้น?
ติดต่อเราเพื่อขอคำปรึกษา แนะนำ Method และคำแนะนำการตั้งระบบ
หรือขอใบเสนอราคาสินค้าได้เลยที่
References
- P. Kumar K, Bhaskar K, T. Gorella, P. Wagh, "Determination of Anionic Polar Pesticides in Grapes using UPLC-MS with Anionic Polar Pesticide Column", Waters Corporation, Milford, MA, USA, Application Note 720006925, May 2020.
- J. De-Alwis, J. Williams, S. Hird, S. Adams, "Evaluation of the Performance of an LC-MS/MS Method for the Determination of Anionic Polar Pesticide Residues in Crops and Foodstuffs Using an Interlaboratory Study", Waters Corporation, Milford, MA, USA, Application Note 720007154, February 2021.
- S. Adams, G. Barknowitz, K. L. Organtini, "Detection of Anionic Polar Pesticides in Food Samples Using the Xevo™ TQ Absolute With Sub µg/kg Limits of Quantification", Waters Corporation, Milford, MA, USA, Application Note 720007567, March 2022.
- S. Adams, B. Wuyts, S. Hird, "Determination of Glyphosate, Aminomethylphosphonic Acid (AMPA), and Glufosinate in Drinking Water Using Direct Analysis by LC-MS/MS", Waters Corporation, Milford, MA, USA, Application Note 720008052, September 2023.


